产品介绍：

Fluo-3,AM是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内，Fluo-3若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，最大激发波长为506nm，最大发射波长为526nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右，发射波长为525～530nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。

用于细胞内钙离子检测时，Fluo-3 AM的常用浓度为0.5-5µM。通常用含有0.5-5µM的Fluo-3 AM的适当溶液和细胞一起在20-37ºC孵育15-60分钟进行荧光探针装载，随后适当洗涤，洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-3 AM在细胞内完全转变成Fluo-3。

 

保存说明：

-20℃避光保存，6个月有效。

 

使用说明（仅供参考）：

1. 取适量Fluo-3 AM母液，用PBS稀释至0.5-5µM的工作液。

注：工作液须即用即配，请勿反复冻融。

2. 对于待检测的培养细胞，去除培养液，用PBS或HBSS洗三遍。

注：因为培养液中的血清含有酯酶会导致Fluo-3 AM分解为Fluo-4，而酚红会导致荧光背景增强。

3. 加入Fluo-3 AM工作液，溶液量以能充分覆盖细胞为准。

4. 20ºC-37ºC孵育10-60分钟进行荧光探针装载。

注：如果是首次实验不能确定孵育温度和时间，建议先尝试37ºC孵育30分钟，观察荧光效果。如果细胞死亡较多，则适当缩短时间或降低温度；如果荧光强度太弱，则适当延长时间。

5. 随后用PBS或HBSS洗涤3次，洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-3 AM在细胞内完全转变成Fluo-3。

6. 如有需要，可以使用适当药物来刺激细胞。

7. 用激光共聚焦显微镜、荧光酶标仪、荧光分光光度计或流式细胞仪等荧光检测仪器检测Fluo-3的荧光，以确定细胞内钙离子浓度的变化。

 

注意事项：

1. 标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。

2. 本Fluo-3 AM在4ºC、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25ºC水浴温育片刻至全部融解后使用。

3. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭

4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

本产品在文章中的写法：

英文： Dowobio （Shanghai，China）

中文： 上海多沃生物科技有限公司  Dowobio，上海