产品介绍：

Polybrene（聚凝胺，hexadimethrine bromide）是一种多聚阳离子聚合物，常用于哺乳动物细胞的DNA转染实验以增强脂质体的转染效率。Polybrene目前广泛用于逆转录病毒介导的基因转染，慢病毒介导的基因转染，作用机理可能是通过中和细胞表面唾液酸与病毒颗粒之间的静电排斥从而促进吸附作用。

Polybrene也是一种有名的抗肝素剂（肝素拮抗剂），常用来生产非特异性凝集的红细胞。另外Polybrene也多用于蛋白测序，因为小剂量的Polybrene在自动测序分析可明显改善多肽的降解现象。PVDF膜加入polybrene还能提高膜的亲和性。

本产品品以溶液形式提供，其中10mg/ml包装产品为超纯水配制并用0.22μm滤膜除菌处理。

 

保存说明：

冰袋运输；-20℃干燥、避光保存。

 

使用说明：

1. 推荐工作浓度：

Polybrene最佳终浓度因不同细胞株而异，通常范围在2~10μg/ml，最常用的浓度为5~8μg/ml。可以通过查阅相关文献或者预实验来摸索。

2. 使用方法（仅供参考）：

试验一：逆转录病毒感染（Retroviral Infection）

a. 重组逆转录病毒原液的制备：取5 mL生长培养基（5%血清）加入含单层转染逆转录包装细胞的100 mm培养盘内。孵育24 h后，吸去培养液并用0.45 μm滤器过滤。

b. 待感染细胞的培养：100 mm培养盘内加入10 mL完全培养基，细胞密度为5×105/盘。

c. 病毒感染：细胞培养24 h后，吸去完全培养液。用含polybrene的2 mL病毒上清（或将病毒原液稀释到2 mL）感染细胞，polybrene的终浓度为5-10μg/mL。37°C孵育3-6 h。

d. 收集病毒颗粒：加入8 mL完全培养基。感染3天后，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。

实验二：转染

a. 完全生长培养基培养细胞，培养细胞密度约50%。

b. 孵育细胞18-24 h后准备DNA-培养基-Polybrene混合液，按如下操作制备混合液：

①添加完全培养基（60 mm培养皿2 mL，100 mm培养皿3 mL），37°C预热；

②添加10 ng~10 µg质粒轻轻混匀；

③加入Polybrene至终浓度为5-10 μg/mL。轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。

c. 去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液，在37°C孵育细胞6-20 h。细胞培养的前6 h内约每1.5 h轻柔混匀。

d. 去除DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution（15%DMSO in1×HBSS）轻轻盖住细胞（60 mm培养皿3 mL，100 mm培养皿4 mL）。每次加入溶液时用手轻晃培养盘10 s，使得液体均匀分布。然后37°C孵育细胞4 min。

e. 立即去除DMSO shock solution，用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60 mm培养皿每次用5mL培养液清洗，100 mm培养皿每次用10 mL培养液清洗。

f. 加入完全培养基到细胞中。

g. 稳定转化：去除生长培养基，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。

h. 瞬时表达：去除生长培养基，加入新鲜的生长培养基。24-72 h后收获细胞。

 

注意事项：

1. 为避免反复冻融，收到本产品或本产品配制成溶液后建议适当分装后-20ºC保存。

2. Polybrene对某些细胞（如末端分化的神经元，DC细胞）毒性较大，初次应用建议先做毒性测试。

3. 本产品可能对人体有一定的毒害作用，请注意适当防护，以避免直接接触人体或吸入体内。

4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

本产品在文章中的写法：

英文： Dowobio （Shanghai，China）

中文： 上海多沃生物科技有限公司  Dowobio，上海