产品介绍：

鼠尾胶原蛋白 I 型是通过 Birkedal-Hansen 的方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。本公司鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿，培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶，模拟真实的生长环境，使细胞在三维环境中生长。

 

保存说明：

冰袋运输。4℃保存，有效期1年。不可冻存。

 

使用说明：

1. 细胞培养器皿的表面包被 推荐浓度： 1-5ug/cm²

以包被浓度为 2 ug/cm²为例：

用无菌 0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸将胶原蛋白稀释到 0.012mg/ml。按下面表格体积加到相应的培养器皿中。

培养皿类型	表面积(cm2 ,每孔或每皿)	加入 0.012mg/ml 胶原的体积 ( ul )
96孔细胞培养板	0.3	50
24孔细胞培养板	1.9	300
12孔细胞培养板	3.8	600
6孔细胞培养板	9.5	1580
35mm细胞培养皿	8	1330
60mm细胞培养皿	21	3500
100mm细胞培养皿	55	9170

 

 

确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面，开盖在超净台上过夜晾干。 也可以在室温放置 1小时后，用PBS洗3-4次后直接使用。包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3个月以上的时间。

 

2. 三维胶原的制备

鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/mL以上，pH 7左右时可形成具有一定强度三维胶，建议成胶浓度1-2mg/mL。胶原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06×体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。

需要的溶液(均需要无菌、预冷)：10×PBS(可含10 mg/L的酚红用于pH指示)或10×培养液，0.1mol/L NaOH，0.1mol/L 乙酸(一般不用)，双蒸水

 

A. 不含细胞的三维胶原的制备(以配制1mL，1mg/mL三维胶为例)：

1) 将200μL鼠尾胶原蛋白I型(5mg/mL)加到置于冰浴的离心管中，加入 690μL H₂O。

2) 然后加到12μL 0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12μL 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结)，立即混匀。

3) 再加入100μL 10×PBS或10×培养液，混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。

4) 将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。

 

B. 含细胞的三维胶原的制备(以配制1 mL，1mg/mL三维胶为例)：

1) 准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。

2) 将200μL鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/mL)加到12μL 0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12μL 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结)，立即混匀。

3) 再加入23μL 10×PBS或10×培养液，混匀(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。

4) 加入760μL的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。

5) 将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。

 

注意事项：

1. 鼠尾胶原蛋白I型在室温下pH中性时可迅速成胶，在操作过程中要尽量保持低温。

2. 整个操作请在无菌环境下无菌操作，避免污染以影响细胞生长。

3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

本产品在文章中的写法：

英文： Dowobio （Shanghai，China）

中文： 上海多沃生物科技有限公司  Dowobio，上海