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产品名称:Collagen from rat tail胶原蛋白 I(鼠尾)

英文名称:

产品货号:DW3020

产品包装:5mg

产品价格:720

保存温度:4℃

保质期:一年

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产品介绍

鼠尾胶原蛋白 I 型是通过 Birkedal-Hansen 的方法,通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。本公司鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿,培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶,模拟真实的生长环境,使细胞在三维环境中生长。

 

保存说明:

冰袋运输。4℃保存,有效期1年。不可冻存。

 

使用说明:

1. 细胞培养器皿的表面包被 推荐浓度: 1-5ug/cm2

以包被浓度为 2 ug/cm2为例:

用无菌 0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸将胶原蛋白稀释到 0.012mg/ml。按下面表格体积加到相应的培养器皿中。

培养皿类型

表面积(cm2 ,每孔或每皿)

加入 0.012mg/ml 胶原的体积 ( ul )

96孔细胞培养板

0.3

50

24孔细胞培养板

1.9

300

12孔细胞培养板

3.8

600

6孔细胞培养板

9.5

1580

35mm细胞培养皿

8

1330

60mm细胞培养皿

21

3500

100mm细胞培养皿

55

9170

 

 

确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面,开盖在超净台上过夜晾干。 也可以在室温放置 1小时后,用PBS洗3-4次后直接使用。包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3个月以上的时间。

 

2. 三维胶原的制备

鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/mL以上,pH 7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/mL。胶原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,在成胶过程中需要加入0.06×体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。

需要的溶液(均需要无菌、预冷):10×PBS(可含10 mg/L的酚红用于pH指示)或10×培养液,0.1mol/L NaOH,0.1mol/L 乙酸(一般不用),双蒸水

 

A. 不含细胞的三维胶原的制备(以配制1mL,1mg/mL三维胶为例):

1) 将200μL鼠尾胶原蛋白I型(5mg/mL)加到置于冰浴的离心管中,加入 690μL H2O。

2) 然后加到12μL 0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12μL 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。

3) 再加入100μL 10×PBS或10×培养液,混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。

4) 将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS,使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。

 

B. 含细胞的三维胶原的制备(以配制1 mL,1mg/mL三维胶为例):

1) 准备好悬浮于培养液的细胞,并放置于冰浴中。

2) 将200μL鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/mL)加到12μL 0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12μL 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。

3) 再加入23μL 10×PBS或10×培养液,混匀(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。

4) 加入760μL的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。

5) 将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。

 

注意事项:

1. 鼠尾胶原蛋白I型在室温下pH中性时可迅速成胶,在操作过程中要尽量保持低温。

2. 整个操作请在无菌环境下无菌操作,避免污染以影响细胞生长。

3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

本产品在文章中的写法:

英文: Dowobio (Shanghai,China)

中文: 上海多沃生物科技有限公司  Dowobio,上海

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