产品描述

伊文思蓝(Evans Blue,CAS NO:314-13-6)，也称作埃文斯蓝，是一种非膜渗透性的染料。当质膜受损，染料能进入细胞质和细胞核，从而将其染成蓝色，可用来检测细胞活力。伊文思蓝还能用来研究血脑屏障(BBB)渗透性，通过与白蛋白结合来指示血脑屏障穿逶蛋白能力。正常情况下，血浆白蛋白不能透过血脑屏障，所以染色后具完整血脑屏障的神经系统不着色，而完整性被破坏的神经系统会着色。本品为2%的伊文思蓝染色液，根据具体用途直接使用或简单稀释后再使用。

 

保存与运输方法

保存:2-8℃避光保存，1年有效。运输:室温运输。

 

使用方法

根据具体实验用途，直接用伊文思蓝染色液(2%)或将其用PBS稀释到伊文思蓝染色液(0.5%)再使用。以下染色步骤以伊文思蓝染色液(0.5%)为例，仅做参考。

一、血脑屏障通透性

一.1取处理后的动物(以小鼠为例)，经尾静脉或股静脉按照2~3ml/kg体重的比例注射伊文思蓝染色液(0.5%) 数s至1min内，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5~1h后处死小鼠，取出目的脑组织。【注意]:伊文思蓝染色液的注射用量需要根据动物类型以及体重来决定。

一.2将脑组织置于1.5ml离心管中，加入1mlPBS，迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆，4℃ 1000g离心15min。

一.3取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育18~24h。该步骤亦可采用如下操作:取上清，按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮，室温孵育24h。

一.4 4℃ 1000g离心20~30min(或2000g离心15min).

一.5取上述溶液1~2ml，用分光光度计测620nm下的OD值。同时测定已知不同梯度的标准伊文思蓝的OD值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测样品的伊文思蓝含量。

 

二、细胞活力鉴定

2.1取100μl重悬细胞到常规离心管内，加入100μl伊文思蓝染色液(0.5%)轻轻混匀，染色3min(染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。

2.2吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。

 

注意事项：

1. Evans Blue Stain对人体有轻微毒性，请小心防护。

2. 细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。

3. 血脑屏障通透性实验中，Evans Blue Stain注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。

4. 最好采用低温冷冻离心机进行离心。

5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

本产品在文章中的写法：

英文： Dowobio （Shanghai，China）

中文： 上海多沃生物科技有限公司  Dowobio，上海