1、固定组织：将取下的组织浸泡在4%PFA中，室温过夜。
  脱水处理：依次通过30%、50%、70%、90%的酒精，每次1小时。最后在100%酒精中脱水半小时，去除气泡后再次脱水半小时。
透明化：将组织放入二甲苯中透明处理，两个缸，每缸15分钟。
2、浸蜡：第一个缸为50%二甲苯➕50%蜡，浸泡1小时；第二个缸为100%蜡，过夜。
3、 包埋与切片：将组织包埋，切片后烘干。
4、保存切片：将切片放入37度烘箱过夜或使用烘片机烘干。
5、脱蜡与复水：使用两个脱蜡缸，确保蜡完全去除。复水步骤包括100%、90%、70%、50%、30%的酒精，每个步骤5分钟。
6、抗原修复：选择高温修复或柠檬酸盐修复，高温修复：使用微波炉或高压锅进行修复。

7、封闭：使用3%BSA➕0.4%曲拉通triton➕10%羊血清进行封闭，至少1小时。

8、敷一抗：根据基因选择对应的一抗，用DW2005   IHC一抗稀释液进行稀释，4度冷库过夜。
9、PBST清洗：使用PBST清洗3遍，每次5分钟。
10、敷二抗：根据种属选择对应的二抗，室温敷1-2小时，可选择4度冷库过夜。
11、PBST清洗：再次使用PBST清洗3遍，每次5分钟。
12、封片：DW2199进行封片。