产品介绍：

D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整个生物技术领域，特别是体内活体成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，荧光素（底物）能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性（见下图）。将携带荧光素酶编码基因（Luc）的质粒转染入细胞后，导入研究动物如大小鼠体内，之后注入荧光素，通过生物发光成像技术（BLI）来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

D-荧光素也常用于体外研究，包括荧光素酶和ATP水平分析；报告基因分析；高通量测序和各种污染检测。目前市场上有三种产品形式，D-荧光素（游离酸），D-荧光素钠盐，以及D-荧光素钾盐。这三种产品主要的差别在于溶解特性上。D-荧光素（游离酸）水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱，除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但钠盐和钾盐形式的D-荧光素能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成液体后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。

 

使用方法：

1．体外生物发光检测
1） 用蒸馏水溶解D-荧光素钠盐，配制成30mg/ml的储存液（200×）。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。
2） 用预热好的组织培养基1:200稀释储存液，配制工作液（终浓度150µg/ml）。
3） 去除培养细胞的培养基。
4） 待图像分析前，向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析。

2．  活体成像分析
1） 用无菌的PBS（w/o Mg2+）或者DPBS（w/o Mg2+）配制D-荧光素钠盐工作液（15mg/ml），0.2µm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。一旦使用，放到4℃解冻，保持冰冷且避光。

2） 注射量取决于注射方式，具体如下：

注射方式	剂量
静脉注射（25-27gauge针头）	按10µl/g体重浓度，加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液
腹腔注射（25-27gauge针头）	按10µl /g体重浓度，加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液
肌肉注射（27gauge针头）	50µl，浓度为1-2mg/ml荧光素工作液
鼻内注射（pipette）	50µl，浓度为3mg/ml荧光素工作液

3） 注射入体内10-20 min（待光信号达到最强稳定平台期），再进行成像分析。

注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

 

 

保存说明：

15°C~30°C常温保存，有效期24个月。

 

 

 

注意事项：

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

 

本产品在文章中的写法：

英文： Dowobio （Shanghai，China）

中文： 上海多沃生物科技有限公司  Dowobio，上海