酶解法消化组织:

胰蛋白酶类、胶原酶、溶菌酶、弹性蛋白酶

适用样本类型:肝脏、肾脏、心脏、肺脏、脊髓、脑、肠道、皮肤、肿瘤等;

 

常用的酶的作用：

名 称	货 号	使用组织类型
胶原酶 I	DW3017	上皮、肺、脂肪和肾上腺组织
胶原酶Ⅱ	DW3018	肝脏、骨、甲状腺、心脏和唾液腺组织
胶原酶IV	DW3019	分子量68-130KD不等，哺乳动物广谱消化作用
胶原酶V	DW3108	胰腺小岛组织、结缔组织

 

操作步骤:

1、先将组织剪成泥状。

2、用胰蛋白酶或胶原酶消化组织块，胰蛋白酶适用千消化细胞间质较少的软组织、如胚胎、上皮、肝、肾等组织。胰蛋白酌工作浓度一般为0.1%-0.5%。对于纤维较多的组织或较硬的癌组织常用0.25 %胶原酶，胶原酌对组织中胶原蛋白类结构消化作用强，它仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。胶原酶常用浓度为0.1-0.3ug/ml，用大于组织量30-50 倍的胰蛋白酶液或胶原酶液在 37°C，摇床上消化组织，消化时间的长短依组织类型而定，一般来说，胰蛋白酶油作用 20-60 min，胶原酶需1-4h左右一般还会加入DNA核酸内切酶。

3、消化完毕后，将细胞悬液通过200目孔径尼龙网过滤，以除掉未充分消化的组织;4、已过滤的细胞悬液经1500rpm离心5min后，弃上清液，加红细胞裂解液重悬沉淀，室温作用5min，加等体积的PBS中和后，1500rpm离心5min，弃上清，用PBS洗涤一次，再用PBS重悬，细胞计数后即可使用。