胞质DNA提取的试剂盒

（适合从动物组织和细胞中提取基因组 DNA）

 

试剂盒组成

K2301-50 (50 次)

1	Dowobio Mini  Column	50
2	2 ml Collection Tube	50
3	Buffer A (Lysis solution)	2 × 30 ml
4	Buffer B (Wash solution 1)	50 ml
5	Buffer C (Wash solution 2) 使用前加入无水乙醇	50 ml
6	Buffer D (Elution solution)	15 ml

 

产品特点：

Dowobio DNA Extraction Kit 采用独特的疏水膜技术，高效去除组织蛋白等各种干扰物，

提取高纯度的 DNA。试剂盒采用独特的缓冲系统，可从多种不同类型动物组织和细胞中快速速提取基因组 DNA。

保存说明：

本试剂盒在室温（8℃）下可保存一年。

注意事项：

1. 实验前准备工作：在实验开始前，详细阅读该手册熟悉各步骤，并准备好所有的试剂盒组分，1.5 ml 和 2

ml 灭菌离心管，以及 37 ℃和 65 ℃的温浴条件。

2. Buffer A在低温时可能产生混浊或沉淀，在 37-50℃温浴片刻即可。

3. Buffer C 第一次使用前请按瓶上标签加入 50 ml 95%或无水乙醇。每次使用后，请立即拧紧盖子。

操作步骤：

（一）样品处理

1. 样本处理

a. 组织匀浆：称取100~200mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL预冷的A液，反复研磨。0℃冰浴中上下研磨组织20次；有未研磨开的组织，可用双层纱布或者滤网过滤。

 

b. 培养细胞：消化细胞，PBS洗涤，1000g离心3min收集细胞，计数。每次提取需要5 ×107个细胞，加入1.0 mL冰预冷的A液重悬细胞，4度震荡细胞悬液10分钟。

 

c. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管中，4℃，1000g离心10min。收集上清。

 

（二）吸附

2. 将上清液或裂解液转移至已平衡的吸附柱內，室温 13 000 rpm 离心 30 s，使裂解液完全流过柱子。保留

柱，弃去收集管中的过滤液，将柱重新放入收集管。

 

注意：1）室温太低可能造成 Buffer A混浊或沉淀，在 37 ℃温浴片刻即可。

2）如混合液体积过大，可以分成数次上柱，每次上样量不要超过 700 μl。

3. （可选）加入 30 μl 浓度为 20-50 μg/ml 的 RNase A 于柱的膜上，37 ℃放置 5-10 min。

 

注意：本试剂盒没有配备 RNase A 溶液。一般来说，这一步没有必要，因为本试剂盒的纯化柱对 RNA 没有

吸附能力。如果实验要求不能残留微量 RNA，可采用这一步处理。

 

(三) 漂洗

4. 加入 700 μl Buffer B，室温 13 000 rpm 离心 30 s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。

5. 加入 700 μl Buffer C，室温 13 000 rpm 离心 30 s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。

 

注意：Buffer C 在首次使用之前必须加入 50 ml 95%或无水乙醇，并置于室温下保存。

 

6. （可选）重复用 700 μl 70%乙醇（室温）洗涤柱子。室温 12 000 rpm 离心 1 min。

7. 弃收集管中的滤液，将空柱套回 2 ml 收集管内。室温下，最高转速或 13 000 rpm 离心 2 min 以甩干柱

子基质残余的液体。

 

注意：此步骤不可省，否则将导致乙醇残留于 DNA 中，影响后续反应。

 

(四)洗脱

8. 把柱子装在一个新的 1.5 ml 离心管上，加入 50 μl 的Buffer D（可用灭菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0 或纯水代替，纯水可预先用 NaOH 调 pH 值至 8.0），65 ℃放置 2-5 min，13 000 rpm 离心 1 min 以洗脱 DNA。

（也可以将 Buffer D预热至 65℃，再加至膜上，可以减少放置时间至 1min）

注意：小心加 Buffer D 到柱中吸附膜的中间部位，并确保液体将膜全部覆盖。

 

9. DNA 可保存于 4 ℃，若长时间保存，可冻存于-20 ℃

 

本产品在文章中的写法：

英文： Dowobio （Shanghai，China）

中文： 上海多沃生物科技有限公司  Dowobio，上海