操作步骤：
1.用颈椎脱位法处死小鼠，立即取出完整的脑组织，放入装有提取缓冲液中预冷中。

2. 提取冷新鲜缓冲液来冲洗大脑，直到大部分血液被清除。

3. 在烧杯中，用小剪刀将脑切成冰块。

4. 将切碎的脑转移到匀浆器中，加入大约3ml的冷提取缓冲液。

5. 将匀浆器放入冰容器中，轻轻匀浆十次。避免气泡的形成是获得高质量线粒体的关键。

6. 将匀浆转移到离心管中，用新鲜冷萃取缓冲液完成至30-40 ml。

7. 在700 x g和4°C下离心10分钟。将上清倒入新的冷冻管中，丢弃含有细胞核和完整细胞的颗粒。

8. 再次在700 x g下在4°C下离心10分钟，然后将上清倒入新的冷冻管中。

9. 在4°C下，10000 x g离心15分钟。丢弃上清，加100ul A液+20ul B液。

10. 在4°C下，10000 x g离心15分钟，丢弃上清，将最终颗粒重新悬浮在尽可能小体积(约0.1 ml)的萃取缓冲液或特定的实验缓冲液中。

11. 分离后，按标准方法测定蛋白浓度。一般来说，从一个大脑中获得大约2-3毫克的线粒体蛋白。

                                 

 

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