过继免疫治疗已用于治疗很多类型的癌症，而树突状细胞可诱导、调节这种免疫反应，因此逐渐成为肿瘤疫苗的佐剂。DCs是一种强力的抗原递呈细胞，可识别、处理递呈外来抗原至T细胞。

在临床制备疫苗时，通常需要数百万的DCs作为佐剂。树突状细胞本来就存在于外周血，但是外周血DCs浓度非常低，所以收集外周血DCs是不实际的。因此，通常用造血干细胞或外周血单核细胞来制备树突状细胞。

      DCs来源最常见的就是外周血单个核细胞（PBMC）。大量的PBMC通过白细胞分离术收集，并通过粘附、淘洗、免疫磁珠分选等方式，进一步纯化。这些单核细胞用GM-CSF和IL-4刺激后可生成DCs，不过此时的DCs是静止或未成熟的，被称为iDCs。有些过继性免疫治疗使用iDCs，但是，现在成熟DCs（mDCs）使用却越来越多了，因为与iDCs相比，mDCs表达更高水平的共刺激分子，产生更多的细胞因子，刺激细胞毒T细胞的能力更强。

准备的试剂：

1640培养基，FBS，100mm平皿，6孔板，吸管，细胞因子（GM-CSF,IL-4，TNF-a，IL-1b，IL-6，PGE2）

 

步骤：

1、分离的PBMC（磁珠分选可以省掉步骤2和3）

2、 加10ml 1640培养基培养在100mm平皿中，培养箱中放置4小时。

3、吸走悬浮细胞（PBLs），贴壁细胞用PBS洗涤三次

4、再用PBS将贴壁细胞吹下来，离心后用台盼蓝进行染色计数。

5、再细胞培养于6孔板中，同时加细胞因子GM-CSF和IL-4，浓度为1000IU/ml。

6、每隔一天半量换液，同时补加细胞因子。第6天时加入细胞因子TNF-a(10ng/ml)，IL-1b(10ng/ml)，IL-6(1000U/ml)和PGE2(1mg/ml)，继续培养到第8天，即为成熟的DCs。能明显看到细胞表面树突状增多，细胞表面积增大。此时的细胞并不是成熟细胞。