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产品介绍:
RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞、组织快速裂解液。RIPA 裂解液裂解后的蛋白样品可以用于常规的 Western、免疫沉淀(immunol precipitation,IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。
RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
本产品为中效裂解液,主要成分为50mM Tris (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,0.1% SDS,1% sodium deoxycholate,以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。
对于组织样品:每20毫克组织加入150-250微升裂解液。对于软骨、皮肤等组织,可适当减少试剂用量,以提高蛋白浓度。
对于培养细胞样品:通常6孔板每孔细胞加入150-250 ul 裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。
裂解时可能会出现较粘稠状。可用移液器反复吹打,直至呈液状为止。如果一直较稠,可再加入适量裂解液。
保存说明:
-20ºC保存,一年有效。
使用说明:
1. 对于组织样品:
a. 组织块用冷 PBS 洗涤,去除血污。剪成小块置于匀浆器中。
b. 加入适量裂解液(使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂,最终浓度为1mM)冰上彻底匀浆,使其充分裂解。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
c. 充分裂解后,12000g 离心 5min,收集上清,即为总蛋白溶液。
2. 对于细胞培养样品:
a. 贴壁细胞:
①去除培养液,用 PBS 冲洗细胞 2-3 次。最后一次彻底吸干残留液。
②每 6 孔板细胞加约150-250 ul 裂解液(在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂),移液器反复吹打数 次,使裂解液充分接触细胞。
b. 悬浮细胞:
①离心收集细胞,去除培养基,用 PBS 冲洗细胞 1-2 次。最后一次彻底吸干残留液。
②每 6 孔板细胞加约150-250 ul 裂解液(在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂),移液器反复吹打数次,充分混匀。
c. 充分裂解后,12000g 离心 5min,收集上清,即为总蛋白。
注意事项:
1. 本产品宜分装后使用,切忌多次反复冻融。
2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品在文章中的写法:
英文: Dowobio (Shanghai,China)
中文: 上海多沃生物科技有限公司 Dowobio,上海