产品介绍：

该试剂采用纳米技术合成。转染试剂通过物理作用将病毒富集在细胞表面以增强感染效率。由于纳米技术的应用，转染试剂在大幅度提高慢病毒感染效率的同时，细胞毒性非常小，并且不干扰细胞生理功能。

验证结果：

保存说明：

本品常温运输，储存于 4℃，有效期 12 个月。

实验过程：

1. 提前一天细胞铺板

提前一天种植细胞，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。

感染实验

1．将转染试剂用无血清或者1-2%血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成增强剂稀释液。

2．将病毒浓缩液用无血清或者1-2%血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成病毒稀释液。

注：由于病毒浓度情况不同，具体病毒浓缩液用量酌情依据常规用量，建议进行和增强剂配合的梯度实验。

3．将增强剂稀释液和病毒稀释液充分混合，4℃静置15分钟。

4．上述混合液加入到含完全培养基的细胞上，37℃培养8小时后观察细胞状态，如没有明显变化，不要更换培养基，继续培养24小时后常规更换培养基。由于慢病毒感染较慢，一般在感染96小时后观察结果。

表1不同细胞培养容器推荐用量

细胞培养容器	表面积(cm2)	表面积相对24-well比率	每孔用量	每孔稀释液用量	每孔培养基总量
96-well	0.3	0.2	0.5-1.5μl	10μl	100μl
48-well	0.7	0.4	1-3μl	15μl	200μl
24-well	1.9	1	2.5-7.5μl	25μl	500μl
12-well	3.8	2	5-15μl	25μl	1ml
6-well/35-mm	10	5	10-30μl	50μl	2ml
60mm/T25flask	21	10	25-75μl	125μl	5ml
100mm/T75flask	58	30	75-225μl	250μl	15ml

 

 

*可根据毒性，效率等因素单独增减

*此处用量仅做说明，具体用量可酌情依据常规用量

 

注意事项：

1．采用转染试剂增强后，感染时的细胞融合度对感染效果有影响，建议细胞融合度在50%左右时进行感染实验(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。

2．在使用转染试剂增强剂之前，应先测定感染细胞最佳的MOI值(Multiplicity of Infection，感染复数)是指每个细胞平均感染的病毒数，通常MOI越高，病毒整合到染色体的数量以及目的蛋白的表达量越高。对于分裂活跃的细胞，比如Hela、293细胞，MOI=1～3时，80%以上的细胞均表达目的基因。而对于非分裂细胞，如原代细胞，感染效率较低，需要进行MOI梯度实验，测定感染细胞最佳的MOI值。在最佳的MOI值基础上应用增强剂效果更好。

3．转染试剂和病毒的稀释液采用和细胞基础培养基一致的无血清或者1-2%血清液体，如无血清或者1-2%血清DMEM或1640。

4．转染试剂和感染效率的关系，在其他条件固定的情况下，增强剂用量在推荐用量的1-3倍范围内，用量越大，感染效率越高。

5．本品使用安全，未发现任何生物、化学毒性。如不慎沾染，用清水冲洗即可。

6．本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

7．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

常见问题及解决方案：

问题	可能原因	解决方案
使用增强剂后效果不明显	病毒浓度低	加大病毒用量
	细胞密度大	减少细胞密度
	增强不明显	增大增强及用量1-3倍

本产品在文章中的写法：

英文： Dowobio （Shanghai，China）

中文： 上海多沃生物科技有限公司  Dowobio，上海