—— 1小时替代过夜，一步孵育，无需封闭

 

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1. 产品名称与概述

产品概述： 本产品是一种创新性的多功能抗体孵育工作液，专为Western Blot实验设计。它集成了快速反应增强、背景抑制和蛋白稳定功能，可直接用于一抗和二抗的稀释与孵育，完全省去独立的封闭步骤。核心特点是允许用户在室温下仅孵育1小时，即可获得与传统稀释液4℃过夜孵育同等甚至更优的检测信号与信噪比，同时保持对传统过夜孵育方式的完全兼容性，为实验者提供了极大的灵活性和效率提升。

 

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2. 产品原理

本孵育液的基础是优化的生理相容性缓冲体系，并添加了以下关键组分：

反应增强剂： 促进抗体与抗原的特异性结合，大幅缩短达到平衡结合所需的时间。

多功能背景抑制剂： 在抗体孵育过程中同步、动态地占据膜上的非特异性位点，实现“孵育即封闭”的效果，有效降低背景。

稳定保护剂： 保持抗体活性和抗原表位的稳定性，确保快速孵育条件下的反应效率。

 

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3. 核心优势

极速高效： 室温1小时完成一抗孵育，比常规过夜（12-16小时）节省超过90%的时间。

效果卓越： 专有配方确保快速结合与低背景，实验结果在信号强度、特异性和条带清晰度上均达到或超越常规过夜孵育水平。

一步简化： 免去独立的封闭步骤，将封闭、一抗孵育、二抗孵育三步简化为两步，缩短总流程2-3小时，减少操作误差。

灵活兼容： 完美兼容传统实验习惯，可根据样本需求自由选择室温快速孵育（1小时） 或 4℃过夜孵育。

经济通用： 适用于所有基于膜（PVDF、NC膜）的Western Blot实验，兼容小鼠、兔、山羊等多种来源的一抗/二抗。

 

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4. 实验所需材料

*配胶及电泳全套

*已转印蛋白的PVDF膜或NC膜

*待检测的一抗

*对应的HRP（或其它荧光）标记的二抗

*TBST或PBST洗涤液

*摇床（室温及4℃）

*显影/成像系统

 

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5. 实验步骤

注意： 以下步骤以PVDF膜为例。若使用NC膜，可省去甲醇活化步骤。

第一步：膜的准备工

1、转印结束后，将PVDF膜从转印夹中取出。

2、用少量甲醇快速浸润活化PVDF膜（约15秒），随后立即浸入TBST中漂洗1分钟，去除残留甲醇。

第二步：一抗孵育（免封闭）
请根据实验需求选择以下任一方案：

【方案A：快速孵育法】（推荐用于大多数蛋白）

1、将膜完全浸入足量的一抗工作液中（确保完全覆盖）。

2、置于室温摇床上，以中速振荡孵育 60分钟。

 

【方案B：常规过夜孵育法】（推荐用于极低丰度蛋白）

1、同上配制一抗工作液。

2、将膜浸入一抗工作液。

3、置于 4℃冷库或冰箱内，在摇床上低速振荡孵育过夜（12-16小时）。
提示： 孵育后的一抗工作液可回收，于4℃保存并重复使用2-3次（效果可能轻微减弱）。

第三步：洗涤
将膜从一抗工作液中取出，放入足量TBST中。在摇床上快速洗涤3次，每次5分钟。

第四步：二抗孵育（免封闭）

1、使用本孵育液，按照二抗说明书推荐的稀释比例（通常为1:5000至1:20000）稀释HRP标记的二抗，配制二抗工作液

2、将洗涤后的膜浸入二抗工作液中。

3、置于室温摇床上，以中速振荡孵育 30分钟。

第五步：最终洗涤与检测

1、将膜从二抗工作液中取出，放入足量TBST中。在摇床上洗涤3次，每次5分钟。

2、按照所选显影底物（ECL化学发光液等）的说明书进行后续显影/成像操作。

 

 

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建议与注意事项：

1、抗体稀释： 初次使用建议从抗体说明书推荐的常规稀释度开始，后续可根据信号强弱

2、进行优化。快速孵育法有时可采用稍低的稀释度（如降低1.5-2倍）以增强信号。

3、低丰度蛋白： 对于表达量极低的靶蛋白，如果快速法信号偏弱，优先尝试改用4℃过夜孵育，其次再考虑增加一抗浓度。

4、膜的选择： 本产品对PVDF膜和NC膜均适用。PVDF膜具有更高的蛋白结合容量和机械强度，为通用推荐。

 

本产品在文章中的写法：

 

英文： Dowobio （Shanghai，China）

中文： 上海多沃生物科技有限公司  Dowobio，上海